Tests mit getrockneten Blutstropfen (DBS) zum Nachweis von Viren bei Tieren, Hochschule für Life Sciences FHNW

Der Trockenbluttest (DBS) ist eine kostengünstige und minimalinvasive Methode zum Nachweis von Krankheiten und zur Messung biologischer Parameter. Dabei sticht man in den Finger oder die Ferse, fängt einige Tropfen Blut auf einem speziellen Filterpapier auf und schickt das Papier zur Analyse an ein Labor.

Die Technologie ist in der Humanmedizin weit verbreitet: Beispiele hierfür sind das Screening von Neugeborenen auf Stoffwechselerkrankungen sowie Heimtests auf Vitamin D, Östrogen, Testosteron, Cortisol, Thyreoidea-stimulierendes Hormon und Lipide. In der veterinärmedizinischen Diagnostik sind DBS-Tests jedoch noch nicht weit verbreitet.

Im Rahmen dieses Projekts hat unser Team Protokolle für DBS-Tests auf das Hepatitis-E-Virus (HEV), das Afrikanische Schweinepest-Virus (ASFV) und das Aujeszky-Virus (ADV) bei Hausschweinen entwickelt und validiert.

Unsere Ergebnisse zeigen, dass DBS-Tests eine zuverlässige und praktische Alternative zur Verwendung von flüssigen Blutproben für den Nachweis von Antikörperreaktionen auf Viren bei Schweinen darstellen. DBS ist für das Tier deutlich weniger belastend und gefährlich und kann sowohl humanitäre als auch wirtschaftliche Vorteile bieten.

Trotz dieser vielversprechenden Ergebnisse sind gross angelegte Tests mit Feldproben erforderlich, bevor die Technologie in grossem Umfang angewendet werden kann.

Wir verwendeten und bereiteten verschiedene Arten von Blutproben vor, um die diagnostischen Ergebnisse vergleichen zu können:

• flüssig (Plasma)
• getrocknetes Serum (flüssiger Anteil der Blutzellen, getrocknet)
• getrocknetes Vollblut (DBS)

Für Hepatitis E konnten wir positive und negative Proben beschaffen, da die Krankheit weit verbreitet ist. Für die Aujeszky-Krankheit mussten wir positive Proben herstellen, da die Krankheit in Europa ausgerottet wurde. Dazu versetzten wir Blut mit Antikörpern gegen das Virus. Für das afrikanische Schweinepestvirus erhielten wir sowohl positive Proben als auch stellten wir eigene positive Proben durch Versetzen her.

Um die Antikörper aus den getrockneten Blutstropfen zu extrahieren, haben wir Elutionsprotokolle erstellt. Wir haben verschiedene Parameter getestet: die Anzahl der Scheiben, Art und Volumen des Elutionspuffers, die Inkubationszeit der Scheiben im Elutionspuffer sowie das für den Nachweis verwendete Eluatvolumen.

Nachdem wir die Protokolle festgelegt hatten, untersuchten wir 52 DBS-Proben in drei unabhängigen Durchläufen für jeden Erreger.

Zur Bewertung der diagnostischen Leistungsfähigkeit verglichen wir die Ergebnisse der mittels ELISA durchgeführten DBS-Tests mit denen der Tests, die mit den entsprechenden Serum- oder Plasmaproben durchgeführt wurden.